Langkah-langkah Menyiapkan Kultur Sel di Laboratorium
Menyiapkan kultur sel di laboratorium adalah proses yang memerlukan ketelitian dan pemahaman mendalam tentang teknik-teknik dasar biologi sel. Berikut adalah langkah-langkah yang dapat diikuti untuk menyiapkan kultur sel yang efektif dan bebas kontaminasi.
1. Persiapan Alat dan Bahan
Sebelum memulai, pastikan semua alat dan bahan yang diperlukan sudah siap. Ini termasuk:
- Biological Safety Cabinet (BSC): Untuk menciptakan lingkungan steril.
- Inkubator CO2: Untuk menyediakan kondisi fisiologis yang optimal bagi pertumbuhan sel.
- Media Kultur: Mengandung nutrisi, vitamin, dan mineral yang dibutuhkan sel.
- Reagen Disosiasi: Seperti trypsin atau EDTA untuk memisahkan sel dari substrat.
2. Sterilisasi
Sterilisasi adalah langkah penting untuk mencegah kontaminasi. Semua alat dan bahan harus disterilkan menggunakan autoklaf atau metode sterilisasi lainnya. Pastikan juga untuk bekerja di dalam BSC untuk menjaga kebersihan lingkungan kerja.
3. Pemisahan Sel
Sel adheren dapat dipisahkan dari substrat menggunakan enzim digestif seperti trypsin. Proses ini dilakukan dengan mencuci sel menggunakan PBS bebas Mg2+ dan Ca2+, kemudian menambahkan enzim digestif dan menginkubasi pada 37°C hingga sel terlepas dari substrat.
4. Penanaman Sel
Setelah sel terpisah, kumpulkan sel dalam tabung centrifuge steril dan cuci dengan media kultur yang mengandung inhibitor untuk enzim digestif. Selanjutnya, resuspensi sel dalam media kultur lengkap dan tanamkan pada vessel baru dengan konsentrasi yang sesuai.
5. Inkubasi
Inkubasi sel dilakukan dalam inkubator CO2 pada suhu 37°C dengan kondisi 5% CO2. Sel-sel akan tumbuh dan berkembang biak dalam kondisi ini. Pastikan untuk memantau pertumbuhan sel secara berkala menggunakan mikroskop cahaya inverted.
6. Pemeliharaan Kultur
Pemeliharaan kultur sel melibatkan penggantian media secara berkala untuk memastikan sel mendapatkan nutrisi yang cukup dan menghilangkan metabolit toksik. Waktu yang tepat untuk passaging sel adalah saat konfluensi mencapai sekitar 80%.
Dengan mengikuti langkah-langkah di atas, Anda dapat menyiapkan kultur sel yang sehat dan bebas kontaminasi di laboratorium.
Siti R
Saya adalah seorang penulis atau Blogger dari Bandung, saya hobi menulis dan menjadi seorang Blogger pada tahun 2016 sampai sekarang.
